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應(yīng)用固相萃取儀技術(shù)時的注意事項

更新時間:2024-04-18  |  點擊率:891

 應(yīng)用固相萃取儀技術(shù)時的注意事項

1.盡量慢。
我們在用固相萃取儀時,面臨的一個問題就是:液體應(yīng)該以什么速率過柱流出,我的經(jīng)驗是,要想效果好,就要慢,盡量慢。.
對于固相萃取儀柱中的填料,我們?nèi)绻植糠糯蟮乜矗軌蚩吹狡鋵嵥鼈兪怯泻芏嗟目针H,液體流通的渠道很多,如果流得快,相當(dāng)比例的待測組分還來不及與填料充分作用就地從通道流失;所以要慢,給它們一個充分作用的機會。
如何慢呢?一個竅門就是不要用配合抽氣機使用的所謂固相萃取儀器,而采用再普通不過的重力法。利用重力的作用使液體向下流出。在實驗速度上,重力法遠不如吸力法,但是在實驗效果方面,重力法遠比吸力法優(yōu)勝,用吸力法只能得到譜帶吸附,用重力法卻能得到柱頭吸附,在速度和效果兩者的平衡中,我們還是傾向于優(yōu)先保證好的效果。
舉例來說,一個3ml500mg的C18小柱,如果加甲醇活化,其甲醇全部流至篩板時間約為20分鐘,而在過樣品液時,25ml 的液體*多2小時可以流完,而且用重力法如果得當(dāng),工作速率不比吸力法差很多。因為我們可以充分利用空閑時間,用吸力法*須有人在旁邊守候,而重力法由于不需要用電,可以充分利用午休和晚上時間過柱,液體量大時接個堆疊接頭和延長管即可,安排好實驗步驟,工作效率一樣很高。另外,重力法不需要抽氣機和固相萃取儀器。
2.盡量少。
在固相萃取儀條件選擇上,有人為了提高提取效率,盡量多加液體,或選擇填料量大的小柱,我覺得大可不*如此。尤其在用重力法時,由于效率高,很多情況下是柱頭吸附,并不是所有的填料都在起作用,填料多了不僅液體流出速度會更慢,而且在洗脫時的擴散會很明顯。
n. com因此建議,夠用就行,在能保證效率時,填料盡量少,加液也不宜多。
3.實驗條件不宜過分細化。
固相萃取儀從原理上是色譜分離,但是在操作時*好只把它作為吸附萃取劑使用,由于填料性質(zhì)、松緊常有差異,因此在實際實驗中不*因為追求效果的*佳化而設(shè)計出很復(fù)雜的洗脫程序。
在建立條件中,我們應(yīng)該盡量多利用現(xiàn)成的資料,盡快地建立起體系,同時要對操作過于復(fù)雜的步驟保持警惕性,在實驗效果,實驗速率和易操作性三者中取得平衡點。
4.只用一次
固相萃取儀柱*好只用一.次。因為從嚴格的意義上來說,很多物質(zhì)的吸附是不可逆的,一次吸附, 無法洗脫,影響著下一次吸附,雖然有人做過重復(fù)利用的實驗,但是總體來說為了節(jié)省- -點經(jīng)費而大大增加了結(jié)果的不可靠性和不確定性,是很不合算的行為。

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